Лабораторна робота №2 Визначення властивостей ферментів

Лабораторна робота №2

Визначення властивостей ферментів

(1 варіант проведення лабораторної роботи)

Мета: ознайомитися з дією ферментів та перебігом біохімічних реакцій.

Обладнання і матеріали: штатив з пробірками, градуйовані піпетки, крапельниці, колба, скляні палички, водяна баня, розчин Люголя, дистильована вода, стакан із льодом, 0,2%-й водяний розчин крохмалю.

Теоретичний мінімум

Ферменти є біокаталізаторами і мають білкову природу. Виконувати роль каталізаторів ферменти можуть тільки за умови збереження просторової структури, у якій певний фермент активний. Саме у цій структурі фермент утворює фермент-субстратний комплекс.

Активність ферменту проявляється лише за певних умов: тих чи інших значень температури, тиску, рН тощо. Ферменти мають певне розташування як у межах окремої клітини, так і в організмі в цілому.

Практична частина.

Дослід1.

Вивчіть дію ферменту слини (амілази) на крохмаль.

Хід роботи:

1.     Сполосніть ротову порожнину 2-3 рази водою, потім прополощіть 50 мл дистильованої води протягом  3-5 хвилин, потім зберіть утворений розчин слинив колбу.

2.     Пронумеруйте дві пробірки й внесіть у них по 2 мл розчину крохмалю.

3.     У пробірку №1 додайте 0,5 розчину слини, який містить фермент амілазу, а в пробірку №2 – 0,5 мл дистильованої води.

4.     Пробірки №1 і 2 після перемішування витримайте на водяній бані 15 хвилин при температурі +38°С (яка є оптимальною для дії амілази).

5.     Додайте до їхнього вмісту 2-3 краплини розчину Люголя та збовтайте до появи синьо-фіолетового забарвлення розчину.

6.     У пробірці, де була слина, спостерігають знебарвлення  розчину внаслідок розщеплення крохмалю ферментом слини амілазою, а де її не було – зберігається синьо-фіолетове забарвлення.

7.     Результати дослідів запишіть у зошит. Зробіть висновки.

Дослід 2.

Дослідіть вплив температури на активність ферменту слини (амілази)  у реакції з крохмалем.

Хід роботи:

1.     Пронумеруйте чотири пробірки й в усі додайте по 2 мл розчину крохмалю і по 0,5 мл розчину слини.

2.     Пробірку №1 залиште при кімнатній температурі, №2 – витримайте на водяній бані при температурі +38°С, №3 – кип’ятіть на водяній бані, №4 – поставте в склянку з льодом.

3.     Через 10-15 хвилин витягніть пробірки з водяних бань та склянки з льодом. Потім у всі чотири пробірки додайте по 2-3 краплини розчину Люголя. У пробірці №1 спостерігають утворення проміжних продуктів розщеплення крохмалю, які при реакції з йодом  жовтий, червоний, або фіолетовий колір; №2  - містить прозорий розчин, що свідчить про повне розщеплення крохмалю амілазою за оптимальної для цього ферменту температури; №3і4 – позитивна реакція на крохмаль (розчини набувають синьо-фіолетового забарвлення), оскільки амілаза стає неактивною внаслідок кип´ятіння чи охолодження.

4.     Результати дослідів запишіть у зошит. Зробіть висновки.

Лабораторна робота №2

Визначення властивостей ферментів

(2 варіант проведення лабораторної роботи)

Мета: ознайомитися з особливостями каталітичної функції ферментів (на прикладі каталази); виявити сутність та причини денатурації.

Обладнання і матеріали: розчин пероксиду водню Н₂О₂,  фільтрувальний папір,  шматочки сирої та вареної картоплі, сирого та вареного м´яса, яєчний білок, розчин, NaCl.

Теоретичний мінімум

Ферменти – білки, що прискорюють хімічні реакції. Ферменти беруть участь у всіх хімічних реакціях організму.

Н₂О₂ – кінцевий продукт метаболізму клітини. Це токсична речовина, тому необхідно знешкоджувати її в короткий термін. Деякі живі клітини синтезують високо специфічний фермент – каталазу, який розщеплює Н₂О₂. У результаті цієї ферментативної реакції гідроген пероксид розкладається на воду та кисень: 2Н₂О₂ → 2Н₂О + О₂↑

Активність ферменту проявляється лише за певних умов: тих чи інших значень температури, тиску, рН тощо. Ферменти, як і всі білки, є нестійкими сполуками й легко розпадаються під впливом підвищених температур та певних хімічних речовин.

Практична частина.

Дослід 1.

Дослідження ферментативної реакції.

Хід роботи:

1.     Візьміть чотири пробірки, у кожну покладіть по одному шматочку: в першу – сиру картоплю, в другу – варену картоплю, в третю – сире м'ясо, в четверту – варене м'ясо.

2.     У кожну пробірку долийте гідроген пероксид. Результати спостережень запишіть до таблиці.

№	Що робили	Що спостерігали
1	Сира картопля +  Н2О2	________________________________________________
2	Варена картопля +  Н2О2	________________________________________________
3	Сире м'ясо +  Н2О2	________________________________________________
4	Варене м'ясо +  Н2О2	________________________________________________

Дослід 2.

Дослідження причин денатурації білків.

1.     У пробірки налийте по 2-3 мл яєчного білка.

2.     Першу пробірку нагрійте, у другу додайте  розчин солі натрій хлориду, в третю – розчин спирту. Які зміни відбуваються з яєчним білком? Занесіть спостереження до таблиці.

№	Що робили	Що спостерігали	Висновок
1	Білок + нагрівання
2	Білок + NaCl
3	Білок + спирт

У висновку зазначте:

·        функції та умови дії ферментів;

·        причини перебігу або відсутності реакцій у пробірках;

·        практичне значення знань про умови дії ферментів у житті людини.